Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩充

从第一次成现家兔自身免疫到成现1同型肝炎诊疗症状的的发展百余人在学童时期就有很好的阐述，多个家兔自身免疫阴性的学童当中曾70%在毒素转换后10年内患上肝炎，而随访15年的学童这一%-减低到84%。相比之下之下，占诊疗1同型肝炎一半以上的同型1同型肝炎的胃癌机制还没得到更进一步的数据分析方法。

越来越多的人开始用到依此系统来概念1同型肝炎的的发展：个基底在成现多种家兔自身免疫时进入第1阶段，成现家兔素出现异常时进入第2阶段，成现症状时进入第3阶段。一些多发家兔自身免疫阴性的个基底，在1期和2期，的发展很慢，并发展为胃癌的1同型肝炎。我们之前阐述了一小组在首次监测到多种家兔自身免疫采样后大概10年无肝炎的很慢的发展者，这小组患儿人数极少，但外观上并不明确。随后，我们发现家兔自身抗原特异性CD8+T细胞核反应会在的发展较快的患儿当中前提不存在，但在近期胃癌和值得注意的肝炎患儿当中很不易监测到。这可能表明，与的发展患儿相比之下，这些患儿自身免疫反应会的抑制进一步提高。

现代数据分析方法表明，尽管抑制性T细胞核(Treg)数目长时间，但肝炎患儿存在一些功能不足之处，其当中都有对IL-2的反应会灵活性降低。此外，肝炎患儿当中的effectCD4+T细胞核可能对抑制突显抵抗性，展现为effectT细胞核的减缓弱化，大自然激发的Treg和基底外激发的诱发Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞核当中IL-2反应会弱化。本数据分析方法的目的是阐述了CD4+抑制性T细胞核(Treg)在在在极较快的发展者当中的外观上，他们的平均年岁为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX数据分析方法是一项以人群进一步将的交叉数据分析方法，在21岁以下确诊的患儿亲属当中核对1同型肝炎的脆弱原因。我们之前阐述了长期较快的发展者的外观上，他们保证多重家兔自身免疫阴性至少10年，但没成现肝炎的诊疗症状，慢性或非透过性自身免疫。随后，10名此后保证无肝炎并想要透过大量血浆采样的较快的发展者纳入T和B细胞核功能分析方法。在目前的数据分析方法当中，8名慢的发展者(SP小组)，当中位年岁43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的家兔自身免疫阴性。所有的发起者都西北面1同型肝炎的发展的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身免疫对某些抗原的抽血会，然而，一名患儿早已西北面2期大概6年，但没成现诊疗症状，一名患儿被治疗为肝炎，该测试者72岁，在采集测试采样时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据分析方法当中对该小分侄透过了基本上评核。分离出来外周血单个核细胞核(PBMCs)，采用多参数流式细胞核练成和T细胞核减缓试验评核小分侄当中Treg的频百余人、表观和功能。用到FlowSOM和CITRUS(聚类比对、举例来说和紧接著)透过无监督聚类分析方法，评核Treg表观。

结果：与身心健康小分侄相比之下，来自慢的发展基底的失忆CD4+T细胞核的监督聚类说明了，作用于的失忆CD4+ Treg频百余人减低，与糖皮质激素诱发的TNFR之外肽(GITR)传达减低有关。一名HbA1c增大的患儿与的发展较快者和也就是说的相异小组相比之下，Treg明人相同。功能分析方法表明，与身心健康小分侄相比之下，来自较快的发展基底的Treg介导的CD4+effectT细胞核减缓显着损害。展现为对effectCD4+T细胞核CD25和CD134传达的减缓减低。

由此可知1 集中的表观分析方法说明了，CD4+Treg冠状病毒在慢的发展队列当中减低。由FlowSOM转换成的Treg室，群聚在来自所有小分侄的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据上标物传达比对成10个元簇:失忆T细胞核_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T细胞核;HLA-DR + GITR +失忆T细胞核;文件系统Treg_1;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;和文件系统Treg_4。(a)用到9个相同Treg上标转换成的10个元簇的MST。每个终端代表人一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在终端小组四周装裱。每个终端当中的点心由此可知说明单个上标的传达级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以说明了整基底而言上标传达。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)转换成由此可知，以及FlowSOM定位的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于同位素为每个metacluster木箱线或由此可知(同位素> 0.05%)已确定为HD和SP小组:文件系统Treg_2 (e),文件系统Treg_3 (f),文件系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T细胞核(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T细胞核(l)。粉红色红色代表人**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对字母秩检验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 用到CITRUS的预测模同型声称，Treg频百余人的减低是的发展较快的徽章。PG门控(a - f)和柑橘分析方法(g-k)比较SP发起者和也就是说的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞核上的关联性。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的代表人性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富含，然后通过HLA-DR和GITR传达透过分离出来，模拟FlowSOM群基底。(b) HD(黑点)和SP(虎纹)小组以及小分侄SP 606(粉红色)当中CD25+ cd127的频百余人综合由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控侄集的木箱线或由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统T cell)。(g - i)玉米簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度着色，箭头突成的簇被定位为SP和HD队列错综复杂的相同。(j)木箱线或由此可知说明了了在SP(虎纹)和HD(灰点)小组当中，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的相对于同位素(%-)。(k)直方由此可知说明了每个簇的表观(粉红色)和Treg上标相对于传达与时代背景传达(蓝色);上列，文件系统Treg_3;比如说四人，文件系统Treg_4。时代背景与所有其他簇当中上标的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对字母秩检验

由此可知3 与身心健康献血者相比之下，的发展较快者失忆treg的GITR减低。每个失忆CD4+T细胞核元簇(失忆T细胞核_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T细胞核;HLA-DR + GITR +失忆T细胞核;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个传达上标的巨大变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的传达热由此可知(sp606不都有在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇当中所有HD(黄色)、所有SP(蓝色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR传达串联，说明了直方由此可知(c)和综合由此可知(d)。Wilcoxon配对字母秩和检验，p< 0.07(粉红色)所有小分侄都有，p< 0.05(蓝色)小分侄SP 606和也就是说的HD不都有在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR传达，从PG门控，从所有HD(黄色)、所有SP(蓝色)和SP 606(粉红色)串联，说明了直方由此可知(e)和综合由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对字母秩检验

由此可知4 来自较快的发展的CD4+ treg细胞核控制effectCD4+T细胞核的灵活性降低。SP小组用蓝色的线或和红色说明，HD小组用黑色的线或和红色说明，粉红色的线或/红色说明小分侄sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核透过分选。CD4+CD25−(；也者)被上标为CFSE, Treg按判读的%-试样。用抗CD3 /28微珠诱发细胞核，培育3在此之后透过流式细胞核练成监测。(a-d)与CD4+；也者相对于应的treg培育(complex)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培育。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE减缓百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓百分比。用到阴性相异(作用于的响应细胞核不含treg)算出减缓百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

由此可知5 effectCD4+T细胞核对较快的发展的T细胞核诱发的减缓更敏感性。SP小组用蓝色的线或和红色说明，HD小组用黑色的线或和红色说明，粉红色的线或/红色说明小分侄sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核透过分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel上标，treg按判读的%-试样。用抗CD3 /28微珠诱发细胞核，培育3在此之后透过流式细胞核练成(CD25反染)和细胞核因侄分析方法。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同培育。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE减缓花红(b)。(c,d) CD25减缓花红(c)和CD134减缓花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育当中的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论点：我们得成的论点是，来自较快的发展侄的诱发失忆CD4+Treg在GITR传达当中得到了扩展和丰富，强调了进一步数据分析方法Treg在1同型肝炎风险个基底当中的异质性的不足之处。

标题成处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28